HIDRÓLISIS DEL HIPURATO.
La producción de hipuricasa por los estreptococos del grupo B resulta de la hidrólisis del hupurato de sodio con la formación de benzoato de sodio y glicina.
Técnica.
La hidrólisis de ácido hipúrico puede detectarse por uno de dos métodos:
Prueba del benzoato:
Inocular un tubo con medio de hipurato de sodio con el microorganismo en estudio, incubar a 35 C durante 20 horas o más.
Centrifugar el medio para compactar las células y pipetear 0.8 mL del sobrenadante en un tubo de prueba limpio.
Agregar 0.2 mL del reactivo de cloruro férrico al tubo de prueba y mezclar bien.
Prueba de la glicina:
Inocular un asa grande de suspensión de cultivo de estreptococos B-hemolíticos en una alícuota de 0.4 mL del reactivo de hipurato de sodio al 1% en un pequeño tubo de prueba.
Incubar el tubo a 35 C durante 2 horas.
Agregar 0.2 mL del reactivo de nihidrina y mezclar bien.
Interpretación.
Prueba del benzoato:
Después del agregado del reactivo de cloruro férrico se formará un precipitado denso. Si la solución se aclara dentro de los 10 min., la reacción no es específica y se debe a la interacción con el hipurato no hidrolizado o con las proteínas del medio. Si el precipitado persiste después de 10 min., se ha formado benzoato de sodio, lo que indica hidrólisis y un resultado positivo.
Prueba de la glicina:
La aparición de un color púrpura profundo después del agregado del reactivo de nihidrina indica la presencia de glicina en la mezcla y un resultado positivo para la hidrólisis del hipurato. El color debe aparecer dentro de los 10 min. de la adición del reactivo.
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